細胞無(wú)血清培養基被廣泛的應用于培養哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無(wú)血清培養基含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應器剪切力,作為脂質(zhì)和其他生長(cháng)分化因子的載體等。
無(wú)血清培養基應用的優(yōu)點(diǎn):
?。?)成分的限定性;
?。?)產(chǎn)品質(zhì)量一致性;
?。?)簡(jiǎn)化生產(chǎn)過(guò)程;
?。?)易于控制培養環(huán)境;
?。?)細胞類(lèi)型的優(yōu)化配方。
無(wú)血清培養基應用
1、DC細胞、CIK細胞和NK細胞的長(cháng)期增殖培養
2、PBL細胞和TIL細胞的長(cháng)期增殖培養
3、單核細胞和巨噬細胞的長(cháng)期增殖培養
4、T淋巴細胞的長(cháng)期增殖培養
細胞無(wú)血清培養基使用方法
1、采集與分離外周血采集外周血,Ficoll密度梯度離心分離收集單個(gè)核細胞。
2、單個(gè)核細胞的接種與誘導活化
1)0d時(shí),繃胞計數。按細胞密度2x106cell/mL接種至對應體積的培養液中。添加誘導因子YC001一支。添加10%比例的自體血漿。
2)1d時(shí)(24小時(shí)),添加誘導因子YC002、YC003、YC004至已經(jīng)接種細胞的培養液中。將YC005添加至未經(jīng)使用的培養基中,待用。
3、細胞的連續培養與擴增
1)3d時(shí),補入新鮮培養液,調整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。同時(shí)添加新加入培養液體積l10%比例的自體血漿。補液比例大致在1:2左右(原有培養液體積:新加培養液體積)
2)5d時(shí),補入新鮮培養液,調整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。補液比例大致在1:3左右。
3)7d時(shí),補入新鮮培養液,調整細胞密度至(06-08)x106cell/mL。補液比例大致在1:2左右。
4)9d時(shí),將剩余培養液全部加入。
4、收獲細胞
培養周期結束后,依據細胞量收獲細胞。